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    香蕉枯萎病拮抗放线菌8N—10的分离鉴定及抑菌效果评价

    时间:2017-10-08 18:48:22 来源:千叶帆 本文已影响

    http://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201604/jsxk20160448-1-l.jpghttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201604/jsxk20160448-2-l.jpghttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201604/jsxk20160448-3-l.jpghttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201604/jsxk20160448-4-l.jpghttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201604/jsxk20160448-5-l.jpghttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201604/jsxk20160448-6-l.jpghttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201604/jsxk20160448-7-l.jpg
      摘要:为了分离对香蕉枯萎病病原菌有拮抗作用的放线菌,对菌株8N-10进行鉴定及测定抗菌活性。采用梯度稀释涂布平板法和平板对峙法分离拮抗菌,通过形态学特征、生理生化特征、16S rDNA序列测定及建树分析确定其分类学地位。用平板对峙的方法测定菌株对9种香蕉病原菌的拮抗作用,最后用盆栽试验的方法验证菌株8N-10对香蕉枯萎病的防效。结果表明,共分离出10株拮抗放线菌,初步鉴定拮抗性最好的菌株8N-10为诺尔斯氏链霉菌(Streptomyces noursei)对香蕉枯萎病病原菌4号小种的抑菌带达(15.5±0.65) mm。菌株8N-10对所有供试病原菌均具有不同程度的拮抗活性,表现出良好的广谱抗菌特性。其中,菌株8N-10对香蕉叶缘枯斑病病原菌(Alternaria musae)、粉蕉叶枯病病原菌(Pestalogiopsis sp.)、香蕉长形斑病病原菌(Curvularia fallax)的抑菌带均达到10 mm以上,显示了较强的抑制活性。菌株8N-10发酵液对香蕉枯萎病的相对防治率达92.708%,具有很好的防治效果。诺尔斯氏链霉菌8N-10对香蕉枯萎病的抑菌活性高,且其抑菌谱广,具有很好的应用前景。
      关键词:香蕉枯萎病;拮抗菌;诺尔斯氏链霉菌
      中图分类号: S476
      文献标志码: A
      文章编号:1002-1302(2016)04-0179-05
      香蕉枯萎病,别称巴拿马病、黄叶病,是由尖孢镰刀菌古巴专化型引起的毁灭性土传维管束病害[1]。该菌分为4个生理小种[2],其中4号小种侵染范围最广,几乎危害所有的香蕉品种。目前该病已经传遍我国广东、广西、福建、云南、海南等主要香蕉种植产区[3],因此分离具有拮抗作用的放线菌,从而达到生物防治香蕉枯萎病的效果不失为一个很有意义的研究方向。生物防治是植物病虫害综合治理的重要手段,是保护生态环境、实现农业可持续发展的有力保障[4]。何欣等研究发现施用生物有机肥能显着促进香蕉植株生长,有效降低香蕉枯萎病的发病指数[5]。随着人们的不断探究,发现放线菌中的链霉菌对香蕉枯萎病菌的抑制作用非常明显[6]。秦涵淳等用分离出的2株放线菌发酵液进行盆栽试验,结果对香蕉枯萎病防效达86%以上,极显着高于恶霉灵药剂处理[7]。本研究对采集的香蕉根际土壤放线菌进行了分离筛选,选其中1株对香蕉枯萎病菌拮抗作用最强的的放线菌 8N-10 进行菌株鉴定,并测定该菌株对香蕉枯萎病的抑制效果以及菌株对其他香蕉病原菌的广谱拮抗性能。
      1 材料与方法
      1.1 试验材料
      供试病原菌为香蕉枯萎病病原菌(Fusarium oxysporium f. sp. cubense 4,FOC4)、香蕉长形斑病菌(Curvularia fallax)、香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)、香蕉大灰斑病菌(Curvularia lunata)、贡蕉眼斑病菌(Bioplaris oryzae)、香蕉果尖腐烂病菌(Deightoniella troulosa)、香蕉叶缘枯斑病菌(Alternaria musae)、贡蕉烟头病菌(Fusarium sp.)、粉蕉叶枯病菌(Pestalogiopsis sp.)均由笔者所在实验室保存[8]。供试土壤为海南省临高县南宝镇(109°51′18″E,19°47′3″N)香蕉园健康植株根际土壤。除去石子、根系等杂物,混匀后用无菌封口袋采集,于 4 ℃ 冰箱保存。培养基按照文献[9]的方法配制。放线菌分离和培养采用高氏一号琼脂培养基,倒平板前加入0005% 的重铬酸钾来抑制细菌和真菌的生长;用PDA培养基进行病原菌的培养以及拮抗试验;鉴定用培养基参照文献[10]的方法配制。
      1.2 拮抗放线菌的分离与筛选
      1.2.1 土壤放线菌的分离 称取土样5 g,加入45 mL无菌水,于28 ℃、200 r/min的摇床中振荡1 h,吸取上清液用无菌水逐级稀释成10-2、10-3和10-4浓度,每个浓度各吸取 100 μL 涂布到含重铬酸钾的高氏一号培养基平板上,封口膜封口后倒置培养在28 ℃的生化培养箱中,适时挑取不同形态的单个菌落分离划线,纯化并保存。
      1.2.2 筛选拮抗放线菌 采用琼脂块平板对峙培养法[11]筛选拮抗放线菌,用打孔器截取直径5 mm的香蕉枯萎病病原菌菌饼于PDA平板中央,并在周围4个角距离病原菌边缘 2.5 cm 处接种待测菌株,对照只接病原菌菌饼,倒置培养在28 ℃的生化培养箱中,对照组菌丝铺满培养基时观察试验组抑菌情况,测量抑菌带的宽度。根据有无抑菌带筛出对FOC4有拮抗效果的菌株,连续接种5代进行复筛,选取抑菌带最宽的菌株进行下一步试验。
      1.3 拮抗菌株的鉴定
      1.3.1 形态学观察 将拮抗菌株划线接种于高氏一号培养基,28 ℃插片培养 7~14 d,显微镜下观察菌体的形态特征。
      1.3.2 培养特征观察 采用文献[12]提供的方法,将拮抗菌株分别接种在高氏一号、ISP2、ISP3、ISP4、ISP(本文来自:WWw.bDFQy.com 千 叶 帆文摘:香蕉枯萎病拮抗放线菌8N—10的分离鉴定及抑菌效果评价)5、ISP6、ISP7培养基上,28 ℃培养8~15 d,观察培养基内菌丝、气生菌丝的生长状况和可溶性色素的颜色。
      1.3.3 生理生化特性测定 测定拮抗菌株明胶液化、酯酶、脲酶、淀粉水解、纤维素利用、硝酸盐还原、H2S的产生、pH值和氯化钠耐受范围、碳源利用、氮源利用等生理生化特性[10]。
      1.3.4 细胞壁化学成分分析 采用快速薄板层析法[13]对菌株8N-10的全细胞水解液的氨基酸和糖型进行分析。
      1.3.5 分子生物学鉴定 采用碱裂解法提取基因组DNA[14],用通用引物27F,5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′,1 492R,5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′进行PCR扩增。反应体系50 μL,10 μL DNA模板、引物1 492R、27F各17 μL、25 μL DreamTaqTMGreen PCR master mix、22 μL ddH2O。PCR扩增程序:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性1 min,55 ℃退火1 min,72 ℃延伸1.5 min,30个循环;72 ℃终延伸 10 min,4 ℃保存。PCR产物送至北京六合华大基因科技股份有限公司进行测序。将测序获得的16S rDNA序列通过Blast程序、BioEdit、Mega 6.0软件进行分析并构建系统发育
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      小学二年级数学经典试题100个小学二年级数学经典试题100个1.用0、1、2、3能组成多少个不同的三位数?2.小华参加数学竞赛,共有10道赛题。规定答对一题给十分,答错一题扣五分。小华十题全部答完,得了85分。小华答对了几题?3.2,3,5,8,12,(),()4.1,3,7,1...

      二年级答案 日期:2017-03-20

    • 初一上册优化设计答案

      八年级上册素质教育优化设计答案七年级下册素质优化教设计语文参考答案(一)(第一单元)1 略2.D3 B4 C5 D6 三十六计第一套胜战计第一计瞒天过海第二计围魏救赵第三计借刀杀人第四计以逸待劳第五计趁火打劫第六计声东击西第二套敌战计第七计无中生有第八计暗...

      初一答案 日期:2017-05-04

    • 审计实务课后答案

      审计原理与实务课后习题和作业参考答案审计第3版(2007)课后习题和作业参考参考答案第1章一、判断题1 ×2 √3 ×4 √5 ×6 √7 √8 ×9 √10 ×二、单选题1 A2 D3 A4 C5 A6 D7 C8 A9 A10 B三、多选题1 BCD2 ABC3 ABC4 CD5 ABD6 AB

      其他答案 日期:2017-05-07

    • 卓越课堂答案初二上册

      新八上英语作业本答案八年级语文上册训练八年级语文高效课堂语段阅读班级:80姓名:八年级语文组模块一1、根据拼音写汉字。(2分)村边的小河边成里傣家人的乐园。孩子们整日里泡在河里玩shuǎ,……酷爱清洁的女人们就会来到河里洗澡,平日里穿的五颜六色的筒裙,这...

      初二答案 日期:2017-07-26

    • 数理报答案网站

      人教版八年级物理第八章章节检测(含答案)章节达标检测【电功率】一、选择题(每题4分,共32分)1 下列情况中,不属于消耗电能的是()A 电吹风吹出热风B 电子计算机运算数据C 家用台灯通电发光D 橡胶棒摩擦毛皮起电※2 (改编)根据图1所示电灯泡的铭牌所给信...

      其他答案 日期:2017-04-07

    • 人文医学试题及答案

      2013医师定期考核-人文医学模拟试题500题+答案1 任何单位或者个人开展诊疗活动,必须依法取得《医疗机构执业许可证》2医疗机构配制制剂必须取得省级药品监督管理部门批准发给的:C 《医疗机构制剂许可证》3依据《中华人民共和国药品管理法》规定,合法的药品生产企...

      其他答案 日期:2017-08-07

    • 雅思og阅读答案

      浅谈雅思阅读剑桥真题与OG的异同浅谈雅思阅读剑桥真题与OG的异同朗阁大连考试研究中心剑桥雅思官方指南(OG)是剑桥大学考试委员会在2014出版的一本雅思考试全面指导性书籍,其中包含的8套雅思真题均由雅思考官编写。与剑桥真题一样,此书对雅思考生而言具有十分重要的...

      其他答案 日期:2017-03-15

    • 一家人开心的心情说说

      一家人开心的心情说说人生最幸福的事:无外乎是一家人能相聚在一起,谈天说地,相互玩笑吐槽,最后也会是满屋的笑声与欣慰~今天就让瓜泽网小编带大家一起来欣赏一下一家人在一起幸福的说说吧,希望你们能够喜欢!一家人在一起幸福的说说一、今晚既走地鸡煲好正,好...

      心情说说 日期:2017-03-19

    • 怀孕个性说说心情短语

      怀孕个性说说心情短语一、 用刀刻画最幸福的风格,用手指写下最幸福的情书,用手捧起最幸福的爱情二、 微笑就是一种幸福清风悄悄吹过,暖暖的阳光下,临窗而坐,看着渲染奇瑰之光的天空,便能感受到生活的味道三、 去相亲,女孩儿一见到我就吐了,场面很尴尬,我...

      个性说说 日期:2017-06-04

    • 快手说说个性句子

      快手说说个性句子一、 有个人,爱过了就结束了;有句话,说过了就后悔了;有道伤,痛过了就麻木了;有颗心,颤过了就破碎了;一段爱情,过深了就剧终了;一段路口,过难了就错选了;有些东西,放久了就会变质的;()有些事物,发展久了也会变质的;有些感情,因时间...

      个性说说 日期:2017-03-08

    • 情侣旅行发的说说句子

      情侣旅行发的说说句子想呼吸着每座城市的空气,想感受着每座城市的人儿,想看着每座城市的风景。以下是由应届毕业生文学网小编J L为您整理推荐的旅行说说心情,更多相关信息请关注应届毕业生网。一颗说走就走的心,一个会拍照的情侣,一段甜蜜的旅程。一个人的旅行...

      情侣说说 日期:2017-06-05

    • 和老妈合影的个性说说

      和老妈合影的个性说说1、是个旧美人岁月你别伤害她,,2、即使在外面受再大委屈,妈妈的怀抱依然是最温暖的港湾,妈妈您辛苦了,祝妈妈节日快乐,爱你到永远空间说说妈妈3、虽然我偶尔和妈妈顶下嘴,但我绝不容许别人顶撞她!4、妈妈说:要找个爱你的,不要找一个你爱的...

      个性说说 日期:2017-03-30

    • 早上下雨天的心情说说

      16、喜欢的是你的微笑,我的雨天被你照耀,喜欢的是被你拥抱,温暖微妙。17、下雨的天,昔日的点滴浮现。18、下雨的早晨来蒸一蒸刚出炉的。19、下雨下雨,不就想去游个泳么 20、一大早就下雨下楼才知道,穿的人字拖啊尼玛人字拖啊崩的短裤上都是泥点啊我白色的衬衫...

      心情说说 日期:2017-06-10

    • 堵车的心情说说

      堵车的心情说说1、宽坦的马路一时间变的水泄不通。2、车挤成了一疙瘩,司机们烦躁不安,喇叭声响成一片。3、此类多为中年女性,反反复复的看着手机的时间,不断的向车的前方眺望,仿佛她们的心被机关枪打成了筛子一般。手里的手机一刻都没有闲着,不停的给她们的朋友...

      心情说说 日期:2017-04-02

    • 说说凑图专用空白图片

      说说凑图专用空白图片如果你是文字控~欢迎来这看看,这里有各类QQ空间说说 大致分为心情,伤感,个性,搞笑,经典,爱情的说说大全,带图片的说说。-??看贴图片精品视频玩乐1回复贴,共1页图片欧美图片另类图片动漫图片黑白美图专题区发布美图失爻小丸子私聊你还年轻别凑活...

      图片说说 日期:2017-06-30

    • 浮躁的有内涵心情说说

      浮躁的有内涵心情说说表达一个人浮躁的说说一、放下自己的浮躁放下自己的懒惰放下自己的三分钟热度放空自己禁不住诱惑的大脑放开自己容易被任何事物吸引的眼睛静下心来好好做自己该做的事该好好生活了。二、所谓的迷茫,就是才华配不上梦想!能力配不上野心!这时,...

      内涵说说 日期:2017-03-18

    • 爱情英文说说心情短语

      爱情英文说说心情短语一、 Yesterdayistodaysmemory,tomorrowistodaysdream 昨天是今天的回忆,明天是今天的梦。二、 Notpretendtobesilentbuthavenostrengthtocomplain 不是假装沉默,只是无力诉说 三、 Life,

      爱情说说 日期:2017-03-08

    • 大班汉字笔顺书写教案

      基本笔画横、竖教案《横和竖的写法》的写字教学设计教学目的:1.使学生掌握横和竖这两种基本笔画的书写方法,包括起笔、收笔。2.写好带有这两种基本笔画的字“十”、“三”、“工”等,注意生字中横、竖的写法。3.培养学生细(转载自:www BdfQy Com千叶帆文摘:...

      大班教案 日期:2017-02-22

    • 幼儿园笔顺笔画教案全

      幼儿园大班写字课教案怎么写教学目标:通过引导学习使学生提高认真上好写字课、必须写好汉字的思想认识,增强写好汉字的决心和信心。教学重点:写好字的重要性。教学难点:怎样写好字,如何树立信心。教具:范字挂图、多媒体课件相关资料。教学过程:一、引导阶段:...

      幼儿园教案 日期:2017-04-18

    • 幼儿园防邪教安全教案

      防邪教教案“崇尚科学,反对邪教”教案活动目的:了解什么是邪教及邪教组织,邪教的基本特征,从而使广大学生进一步提高识别、抵御和有效防范邪教的能力;培养学生正确的世界观、人生观。活动过程:一、认识邪教1、小品主持人:同学们,你们听说过邪教吗?(听说过!...

      幼儿园教案 日期:2017-05-02

    • 初二英语下1单元教案

      八年级下第一单元英语教案修改稿Unit1What’sthematter?教学目标:1语言目标:描述健康问题的词汇,及如何根据别人的健康问题提建议。2技能目标:能听懂谈论健康问题的对话材料;能根据别人的健康问题提建议;能写出重点单词和重点句型,并能描述怎样对待健康问题。...

      初二教案 日期:2017-06-26

    • 部队形势战备教育教案

      强军目标授课828(教案)聚焦强军目标投身强军实践党的十八大以来,习近平主席站在时代发展和战略全局的高度,对国防和军队建设做出了一系列重要指示,提出了在形势下建设一支听党指挥、能打胜仗、作风优良的人民军队的强军目标,为在新的历史起点上加快推进国防和军队...

      学案教案 日期:2017-03-03

    • 中班健康游戏教案20篇

      中班健康教案第十九周第一节中班健康:故事—病菌来了【活动目标】1、初步了解病菌会传播疾病。2、尝试根据相关线索推测故事情节。3、能比较清楚地回答有关故事的问题。【活动准备】1、亲子故事《病菌来了》(《病菌拜拜》幼儿用书或电子书第2-9页)。2、发霉的面包...

      中班教案 日期:2017-07-20

    • 大班区域活动超市教案

      大班角色游戏商店教案角色游戏:商店(一)活动目标:1.知道商店的基本玩法,通过讨论,提升幼儿对待顾客的经验与态度,能创造性地表现周围的生活。2.通过想象,并结合自己的生活经验,引导幼儿不断加强各角色区的联系,丰富游戏的情节。3.学会协商分配角色,能与...

      大班教案 日期:2017-05-21

    • 培智学校生活语文教案

      《快乐生活》生活语文教学设计培智学校语文教案《袜》培智学校一年级语文《袜》教案曲阜市特殊教育学校孔静一、教学目标(一)知识技能目标1、认读生字“袜”。A类学生(孔东月、孔秋硕)正确认读,发音清楚。B类学生(孔存科、陈晓楠)能识别、跟读,发音清楚。C类...

      语文教案 日期:2017-02-25

    • 摆勾顶腹示范作业教案

      作业二教学设计示范多彩的秋天一、基本说明1教学内容所属模块:幼儿园中班语言领域2年级:幼儿园大班3所用教材出版单位:新疆教育出版社4所属的章节:主题十第三周5学时数:25分钟6单位:青河镇双语幼儿园二、教学设计1、教学目标:1、让感受季节的变化,培养幼儿积...

      学案教案 日期:2017-05-13

    • 大班手工折纸教案

      大班手工折纸《折宝塔》大班手工折纸《折宝塔》大班手工折纸《折宝塔》设计意图:(本文来自:WwW BdfqY Com千叶帆文摘:大班手工折纸教案)《幼儿教育指导纲要》中指出“艺术活动是一种情感和创造性活动。幼儿在艺术活动过程应有愉悦感和个性化的表现。”“不要把艺...

      大班教案 日期:2017-04-19

    • 简笔画hellokitty

        Hello Kitty诞生于1974年,当时三丽鸥公司预定推出一款小钱包,上面的图案希望能设计出一个崭新的人物。而Kitty的第一代设计师清水侑子在设计之初想到小孩子喜欢的动物,不外乎小熊、小狗和小猫而已,由于前

      卡通简笔画 日期:2017-08-18

    • 简笔画angelababy

        Angelababy(杨颖),1989年2月28日出生于上海市,华语影视女演员、时尚模特。2003年,Angelababy以模特身份出道,此后,她因担任时尚模特而在香港崭露头角。

      人物简笔画 日期:2017-08-18

    • 简笔画:康乃馨

        康乃馨,原名:香石竹,英文名:Dianthus caryophyllus 又名:狮头石竹、麝香石竹、大花石竹,拉丁文名:Dianthus caryophyllus L 石竹科、石竹属多年生草本,高40-70厘米,全株无毛,粉绿色。茎丛生,

      风景简笔画 日期:2017-08-18

    • 简笔画.白菜

         白菜,(Brassica rapa pekinensis,异名Brassica campestris pekinensis或Brassica pekinensis)为二年生草本植物,大叶,花淡黄色,原产于中国。[1] 又称结球白菜、包心白菜、黄芽白、胶菜等,在粤语里叫菜。

      果蔬简笔画 日期:2017-08-18

    • 简笔画,忧伤男生

        忧愁哀伤内心忧伤。每个人都有七情六欲。忧伤只是其中一种,是被动消极的情绪,忧伤是人的一种心理感受,是一种不快乐、不高兴的表现,忧伤会让人产生烦躁和不安的情愫,也是加速衰老的催化剂和强化剂。

      人物简笔画 日期:2017-08-18

    • 简笔狐狸画法

        哺乳纲,食肉目犬科动物。属于一般所说的狐狸,又叫红狐、赤狐和草狐。它们灵活的耳朵能对声音进行准确定位、嗅觉灵敏,修长的腿能够快速奔跑,最高时速可达50km h左右,所以主要以鱼、蚌、虾、蟹、鼠类、鸟

      动物简笔画 日期:2017-08-17

    • 简笔牛头图片大全

        魔兽系列中,牛头人在创造它的英语环境里称做托伦(Tauren)。在中文里,人们按照他们的种族外形习惯性的称他们为牛头人。

      优秀简笔画 日期:2017-08-17

    • 简笔海豚

        海豚(学名:Delphinidae)具有齿鲸类典型的形态学性状:纺锤形的身体;单个新月形的呼吸孔;头骨套叠,上颌骨向后扩展与额骨重叠;颅顶偏左的不对称;圆锥形或钉状的齿等。各种间最明显的变异与喙、上下颌、牙齿等

      动物简笔画 日期:2017-08-17

    • 简笔汽车图片

        我国国家最新标准《汽车和挂车类型的术语和定义》(GB T 3730 1—2001)中对汽车有如下定义:由动力驱动,具有4个或4个以上车轮的非轨道承载的车辆,主要用于:载运人员和(或)货物;牵引载运人员和(或)货物的车

      优秀简笔画 日期:2017-08-17

    • 简笔水晶鞋

        水晶鞋是《格林童话》中塑造的童话人物形象灰姑娘(Cinderella)的舞鞋。《灰姑娘》讲述的是一个孝顺且心地善良的女孩子,长期受到继母和姐姐们的虐待,在厨房里做女佣,每天都是灰头土脸脏兮兮的,后来由于善

      物品简笔画 日期:2017-08-17