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    一种新的镰刀菌Q7—31木聚糖酶Xyn9的分离纯化鉴定及酶学特性

    时间:2017-10-20 16:33:38 来源:千叶帆 本文已影响

    http://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201505/jsxk20150512-1-l.jpghttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201505/jsxk20150512-2-l.jpghttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201505/jsxk20150512-3-l.jpghttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201505/jsxk20150512-4-l.jpghttp://img1.qikan.com.cn/qkimages/jsxk/jsxk201505/jsxk20150512-5-l.jpg
      摘要:为对植物病原菌镰刀菌(Fusarium sp.)Q7-31所产木聚糖酶进行鉴定及酶学特性分析,在发酵产酶培养基上对Q7—31进行发酵培养,获得能够高效降解植物细胞壁的粗酶液。然后,采用Sephacry S-100凝胶柱层析和DEAE弱阴离子交换柱层析对粗酶液进行分离纯化后得到木聚糖酶Xyn9,并对其开展蛋白质组学研究和酶学特性分析。结果表明:粗酶液中木聚糖酶比活为16.58U/mg,纤维素酶比活为0.428U/mg,细胞壁降解酶比活为0.0198U/mg,蛋白含量为2.17mg/mL。Xyn9的蛋白质组学研究结果显示,其分子量为21 ku、等电点为6.86,接近GHl0家族。纯化后Xyn9的酶学特性表明,最适反应温度为47℃,最适pH值为5.6,该酶在33℃以下和在pH值5~6的范围内较稳定;金属离子K+对该酶有激活作用,Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+抑制该酶活性,Cu2+、Hg+使该酶完全失活。综合Xyn9的分子量、蛋白质组学结果以及酶学特性,最终将其鉴定为一种新的介于GHl0家族与GHll家族之间的内切木聚糖酶。
      关键词:镰刀菌;木聚糖酶;分离纯化;串联质谱鉴定;酶学特性
      中图分类号:Q55;Q814.1 文献标志码:A 文章编号:1002-1302(2015)05-0042-04
      植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和木质素等物质组成。半纤维素的主要成分是木聚糖,约占植物细胞干质量的30%-35%,是继纤维素之后含量第二丰富的可再生物质资源。其中,木聚糖酶(1,4-β-D—xylanase,EC 3.2.1.8)是一种重要的工业用酶,在造纸工业、能源、饲料及环境等领域中具有很好的应用前景,特别是在纸浆的生物漂白方面的应用。生物降解木质素,就是利用微生物产生的胞外酶使木质素逐步分解转化,从而实现其资源转化。所以,木质素酶作为废弃秸秆回收利用过程中的关键角色,已引起人们的高度重视。我国是农业生产大国,每年秸秆产量大约5.7亿t,占世界秸秆总产量的20%~30%。其中绝大部分因为难以利用,仅作为农家燃料或肥料。如果能够将这些秸秆通过转化成为低聚糖,就可以用作基本碳源,生产各种发酵产品,包括各种氨基酸、有机酸、单细胞蛋白、糖醇类、工业酶类、溶剂或燃剂等。因此,对木聚糖酶的研究具有十分可观的经济效益和社会效益。
      根据疏水性聚类分析方法,将木聚糖酶分(转载自:www.BdfQy.Com 千 叶帆 文摘:一种新的镰刀菌Q7—31木聚糖酶Xyn9的分离纯化鉴定及酶学特性)为GHl0和GHl 1等2个家族。GHl0家族木聚糖酶多为高分子量,通常大于30ku,等电点较低,不仅有催化结构域,还常有碳水化合物结合结构域;GHl1家族木聚糖酶多为单结构域蛋白,相对分子量一般小于30ku,等电点较高。而且2个家族的木聚糖酶在空间结构上的折叠类型不同,即GHl0家族木聚糖酶主要由重复出现的α-螺旋和β-折叠片构成,整体结构像碗状,上面略大下面较小;而GHll家族木聚糖酶具有的典型折叠结构是由β-折叠片为主所构成的单个结构域,这个结构域由2个β-折叠片层扭曲成将近90°角,构成1个深且狭长的沟缝状结构。
      近10年来,基因重组、基因定位突变、细胞融合等技术在纤维素酶菌株的构建上取得了巨大的成果。对于木聚糖酶而言,酶活力偏低是研究开发中遇到的普遍问题,低酶含量造成发酵成本过高,限制了该酶制剂的工业化生产和应用。一般来说,真菌木聚糖酶比细菌的木聚糖酶产量大,例如木霉、曲霉等真菌所产木聚糖酶的酶活力较高,对木聚糖酶的研究也主要集中在这些方面。镰刀菌是一种世界性的土生丝状真菌,其中有一些可以产生多种酶,其能够降解细胞壁中的果胶与纤维素。由于镰刀菌属于病原菌,对镰刀菌的研究多集中在对致病性镰刀菌的检测鉴定、多样性与致病基因等方面,对利用其产酶的研究鲜有报道。本研究对镰刀菌(Fusarium sp.)Q7-31产细胞壁降解酶进行分离纯化,并对纯化后的木聚糖酶进行蛋白鉴定与酶学特性分析,鉴定出介于GHl0家族与GHll家族的内切木聚糖酶Xyn9,为后续研究细胞壁降解酶降解细胞壁的协同反应机制、反应条件及酶系的结构组成奠定基础。
      1.材料与方法
      1.1材料
      1.1.1菌株镰刀菌Q7-31菌株,由青海大学生态环境工程学院微生物实验室于2007年从青海省大通县宝库乡所采土壤中自行分离纯化获得,并保存。
      1.1.2培养基
      固体活化培养基:PDA培养基粉末39g,1 000mL水,121 qC灭菌20min;液体种子培养基:葡萄糖2%,蛋白胨0.3%,Mendels营养盐,121℃高压灭菌20min;发酵产酶培养基:燕麦秸秆粉0.3%,蛋白胨0.3%,Mendels营养盐,121℃高压灭菌20min;Mendels营养盐:(NH4):SO4 1.4g/L、KH2PQ 2.0g/L、尿素0.3g/L、CaCl20.3g/L、MgSO4 0.3g/L、FeSO4 5.0 mg/L、MnSO4 1.6mg/L、ZnSO4 1.4mg/L、COCl2 2.0mg/L。
      1.2方法
      1.2.1菌种活化与发酵将保存在4℃下液体石蜡封存的斜面菌种Q7-31转接至固体活化培养基上,于25℃恒温培养箱中培养,传代2~3次,使菌种充分活化。液体种子制备:在1000mL三角瓶中装入200mL液体种子培养基,从固体活化培养基上接种直径为1.0cm的菌块至液体种子培养基中,于25℃恒温培养箱中静止培养2d后制成液体种子备用。液体发酵培养:在1000mL三角瓶中装入350mL发酵产酶培养基,将制备好的液体种子按10%接入发酵产酶培养基中,25℃ 120r/min条件下摇床培养。1.2.2酶活力的测定采用3",5"二硝基水杨酸(DNS)测定还原糖的方法,测定分别以1%木聚糖、0.5%羧甲基纤维素(cMC)及5mg/mL燕麦秸秆粉为底物时酶液中木聚糖酶、纤维素酶和植物细胞壁降解酶的活力。将1min产生1ug还原糖所需的酶液量定义为1个酶活力单位(u)。
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      化学反应工程第二版课后习题第一章习题12何谓基元反应?基元反应的动力学方程中活化能与反应级数的含义是什么?何谓非基元反应?非基元反应的动力学方程中活化能与反应级数含义是什么?345现有如下基元反应过程,请写出各组分生成速率与浓度之间关系。(1)A+2B?CA+C?D(2)...

      化学答案 日期:2017-03-13

    • 卓越课堂答案初二上册

      新八上英语作业本答案八年级语文上册训练八年级语文高效课堂语段阅读班级:80姓名:八年级语文组模块一1、根据拼音写汉字。(2分)村边的小河边成里傣家人的乐园。孩子们整日里泡在河里玩shuǎ,……酷爱清洁的女人们就会来到河里洗澡,平日里穿的五颜六色的筒裙,这...

      初二答案 日期:2017-07-26

    • 药物化学习题及答案

      药物化学章节习题及答案(完整完美版)02第一章绪论1 1B奥美拉唑1 2D去除脸上皱纹1 3D羟基>甲氨甲基>苯基>氢1 4凡具有治疗、预防、缓解和诊断疾病或调节生理功能、符合药品质量标准并经政府有关部门批准的化合物,称为E 药物1 5硝苯地平的作用靶点为C 离子通道...

      化学答案 日期:2017-03-26

    • 药剂学实验答案

      药剂学实验指导思考题答案实验1、混悬剂的制备混悬剂的稳定性与哪些因素有关?答:混悬剂的稳定性问题主要是物理稳定性,它主要与混悬粒子的沉降速度、微粒的荷电与水化、絮凝与反絮凝、结晶微粒的长大、分散相的浓度和温度等这些因素有关。将樟脑醑加到水中时,注意...

      其他答案 日期:2017-08-09

    • 四年级上册课时特训的答案

      人教版四年级上册数学综合练习题及答案综合能力训练(一)一、直接写出下面各题得数.8×(125-25)48+52÷4160+40÷4(19-11)×125(12+42÷7)×526×8÷26×8二、把下面运算中不正确的地方改过来.1.(841-41)÷25×42.600×(1200-200÷25)=8

      四年级答案 日期:2017-08-10

    • 一年级优化设计的答案

      人教版一年级上认识钟表单元测试(有针对性的习题练习)认识钟表单元测试班级一、认识钟面1、钟面上有()个数,长针是(),短针是()。二、认识整时1、写出钟面上的时间()时()时()时()时三、用两种方法表示钟面的时间。()时()时()时()时四:看看钟...

      一年级答案 日期:2017-04-25

    • 怀孕个性说说心情短语

      怀孕个性说说心情短语一、 用刀刻画最幸福的风格,用手指写下最幸福的情书,用手捧起最幸福的爱情二、 微笑就是一种幸福清风悄悄吹过,暖暖的阳光下,临窗而坐,看着渲染奇瑰之光的天空,便能感受到生活的味道三、 去相亲,女孩儿一见到我就吐了,场面很尴尬,我...

      个性说说 日期:2017-06-04

    • 一家人开心的心情说说

      一家人开心的心情说说人生最幸福的事:无外乎是一家人能相聚在一起,谈天说地,相互玩笑吐槽,最后也会是满屋的笑声与欣慰~今天就让瓜泽网小编带大家一起来欣赏一下一家人在一起幸福的说说吧,希望你们能够喜欢!一家人在一起幸福的说说一、今晚既走地鸡煲好正,好...

      心情说说 日期:2017-03-19

    • 早上下雨天的心情说说

      16、喜欢的是你的微笑,我的雨天被你照耀,喜欢的是被你拥抱,温暖微妙。17、下雨的天,昔日的点滴浮现。18、下雨的早晨来蒸一蒸刚出炉的。19、下雨下雨,不就想去游个泳么 20、一大早就下雨下楼才知道,穿的人字拖啊尼玛人字拖啊崩的短裤上都是泥点啊我白色的衬衫...

      心情说说 日期:2017-06-10

    • 快手说说个性句子

      快手说说个性句子一、 有个人,爱过了就结束了;有句话,说过了就后悔了;有道伤,痛过了就麻木了;有颗心,颤过了就破碎了;一段爱情,过深了就剧终了;一段路口,过难了就错选了;有些东西,放久了就会变质的;()有些事物,发展久了也会变质的;有些感情,因时间...

      个性说说 日期:2017-03-08

    • 和老妈合影的个性说说

      和老妈合影的个性说说1、是个旧美人岁月你别伤害她,,2、即使在外面受再大委屈,妈妈的怀抱依然是最温暖的港湾,妈妈您辛苦了,祝妈妈节日快乐,爱你到永远空间说说妈妈3、虽然我偶尔和妈妈顶下嘴,但我绝不容许别人顶撞她!4、妈妈说:要找个爱你的,不要找一个你爱的...

      个性说说 日期:2017-03-30

    • 爱情英文说说心情短语

      爱情英文说说心情短语一、 Yesterdayistodaysmemory,tomorrowistodaysdream 昨天是今天的回忆,明天是今天的梦。二、 Notpretendtobesilentbuthavenostrengthtocomplain 不是假装沉默,只是无力诉说 三、 Life,

      爱情说说 日期:2017-03-08

    • 忙碌而充实的一天说说

      忙碌而充实的一天说说每天都过的很充实说说一、想要每天都过的很充实想要静下心来不想再抱怨高三很累睡吧愿好梦。 二、不打扰不找你应该是对你最好的爱吧看你每天都过的很充实为你开心希望你一直这样我爱你只是放在心里我会学着忍住忍住自己莫名的失落的感觉。 三...

      其他说说 日期:2017-04-15

    • 情侣旅行发的说说句子

      情侣旅行发的说说句子想呼吸着每座城市的空气,想感受着每座城市的人儿,想看着每座城市的风景。以下是由应届毕业生文学网小编J L为您整理推荐的旅行说说心情,更多相关信息请关注应届毕业生网。一颗说走就走的心,一个会拍照的情侣,一段甜蜜的旅程。一个人的旅行...

      情侣说说 日期:2017-06-05

    • 说说凑图专用空白图片

      说说凑图专用空白图片如果你是文字控~欢迎来这看看,这里有各类QQ空间说说 大致分为心情,伤感,个性,搞笑,经典,爱情的说说大全,带图片的说说。-??看贴图片精品视频玩乐1回复贴,共1页图片欧美图片另类图片动漫图片黑白美图专题区发布美图失爻小丸子私聊你还年轻别凑活...

      图片说说 日期:2017-06-30

    • 霸气说说爱情句子

      霸气说说爱情句子超霸气的十句1、我都舍不得欺负的人,哪能让别人欺负?2、一辈子那么长,等你几年算什么。3、我爱的人我要亲手给她幸福,别人我不放心。4、我想你的时候我一定要找得到你5、不许你们欺负他!全世界只有我才可以!6、放弃你,下辈子吧!!7、全天下最好的...

      爱情说说 日期:2017-04-27

    • 幼儿园笔顺笔画教案全

      幼儿园大班写字课教案怎么写教学目标:通过引导学习使学生提高认真上好写字课、必须写好汉字的思想认识,增强写好汉字的决心和信心。教学重点:写好字的重要性。教学难点:怎样写好字,如何树立信心。教具:范字挂图、多媒体课件相关资料。教学过程:一、引导阶段:...

      幼儿园教案 日期:2017-04-18

    • 中班社会领域教案

      幼儿园中班社会活动教案幼儿园中班社会活动教案《分享真快乐》活动目标:1、学习与他人分享食物、玩具、图书等。2、懂得抢别人的玩具是不礼貌的行为,体验分享带来的乐趣。活动准备:故事《明明的变形金刚》、幼儿自带的一些玩具或食物。活动重点:能与他人分享食物...

      中班教案 日期:2017-04-03

    • 小班美工教案生日蛋糕

      美术教案-生日蛋糕活动名称:生日蛋糕设计思想:本节课旨在通过祖国的生日,系列活动,让儿在身为中国人的自豪感中欣赏探知祖国博大精深的文化艺术底蕴,探索祖国传统艺术的美,能够从色彩造型等多重角度来创造美,表现美,本次主题旨在通过祖国的生日活动,使幼儿进...

      小班教案 日期:2017-02-27

    • 部队形势战备教育教案

      强军目标授课828(教案)聚焦强军目标投身强军实践党的十八大以来,习近平主席站在时代发展和战略全局的高度,对国防和军队建设做出了一系列重要指示,提出了在形势下建设一支听党指挥、能打胜仗、作风优良的人民军队的强军目标,为在新的历史起点上加快推进国防和军队...

      学案教案 日期:2017-03-03

    • 中班手工折纸教案20篇

      手工教案大白兔折纸2012~2013学年上学期大班手工教案陆良县龙海乡核桃村希望幼儿园李玉芬课题:小白兔(折纸)学科:手工制作年级:大班教学目标:1、通过教师引导和示范及幼儿动手实践,使幼儿能按要求折出小白兔的形状;2、通过实践,培养幼儿动手操作能力及观察能...

      中班教案 日期:2017-03-07

    • 英语初中教案模板范文

      中学英语教案模板_英语教学设计(模板及范例)123初中英语教案范例Unit4Iwanttobeanactor 学校 1Unit4Iwanttobeanactor教学目标:1 学会不同工作的英文表达方式。2 了解同学父母的工作。3 学会简单的介绍自己将来的理想。教学内容:重点词汇:tea

      英语教案 日期:2017-04-05

    • 托班五官教案及反思

      小班语言教案《我的五官》小班语言教案《我的五官》执教:陈思一、活动目标:1、知道五官是我们人体的重要组成部分,懂得怎样去保护自己的五官。2、初步了解五官的构成和用途,知道要爱护五官。3、能听懂老师的口令,做出相应的动作。二、活动准备:1、同样的人物头像2...

      托班教案 日期:2017-06-01

    • 小班饮食安全教案十篇

      小班食品安全教案小班健康活动:饮食安全一、活动目标:1、了解吃各种食物(果冻、鱼、热汤、水果等)时要注意的安全事项,学会正确进食方法。、2、知道吃饭时不包饭和裹饭,细嚼慢咽才有利于健康,不要一边吃一边说话。二、活动准备:食物图片三、活动过程:(一)、教...

      小班教案 日期:2017-04-16

    • 小学语文无生上课教案

      小学高段语文无生试讲(通用模板)小学高段语文无生试讲(通用模板)【一】开场语——印象分1、进入讲课室,微笑着(表现出镇定自若)问好:各位尊敬的评委老师,大家上 下午好!我是XX号,请问我可以开始了吗?2、假设有学生的样子:上课!同学们好!请坐!【二】课...

      语文教案 日期:2017-05-11

    • 大班体能教案及反思

      大班体育教学反思大班体育教学反思大班体育教学反思一:大班体育游戏《快乐做运动》活动设计教学反思一、设计意图:到了大班幼儿喜欢玩有竞争的游戏,且与同伴合作意识增强故本次《快乐做运动》活动的设计基于大班孩子这一特点,通过创设情景“蚂蚁搬运粮食准备过冬...

      大班教案 日期:2017-04-24

    • 简笔画hellokitty

        Hello Kitty诞生于1974年,当时三丽鸥公司预定推出一款小钱包,上面的图案希望能设计出一个崭新的人物。而Kitty的第一代设计师清水侑子在设计之初想到小孩子喜欢的动物,不外乎小熊、小狗和小猫而已,由于前

      卡通简笔画 日期:2017-08-18

    • 简笔画angelababy

        Angelababy(杨颖),1989年2月28日出生于上海市,华语影视女演员、时尚模特。2003年,Angelababy以模特身份出道,此后,她因担任时尚模特而在香港崭露头角。

      人物简笔画 日期:2017-08-18

    • 简笔画:康乃馨

        康乃馨,原名:香石竹,英文名:Dianthus caryophyllus 又名:狮头石竹、麝香石竹、大花石竹,拉丁文名:Dianthus caryophyllus L 石竹科、石竹属多年生草本,高40-70厘米,全株无毛,粉绿色。茎丛生,

      风景简笔画 日期:2017-08-18

    • 简笔画.白菜

         白菜,(Brassica rapa pekinensis,异名Brassica campestris pekinensis或Brassica pekinensis)为二年生草本植物,大叶,花淡黄色,原产于中国。[1] 又称结球白菜、包心白菜、黄芽白、胶菜等,在粤语里叫菜。

      果蔬简笔画 日期:2017-08-18

    • 简笔画,忧伤男生

        忧愁哀伤内心忧伤。每个人都有七情六欲。忧伤只是其中一种,是被动消极的情绪,忧伤是人的一种心理感受,是一种不快乐、不高兴的表现,忧伤会让人产生烦躁和不安的情愫,也是加速衰老的催化剂和强化剂。

      人物简笔画 日期:2017-08-18

    • 简笔狐狸画法

        哺乳纲,食肉目犬科动物。属于一般所说的狐狸,又叫红狐、赤狐和草狐。它们灵活的耳朵能对声音进行准确定位、嗅觉灵敏,修长的腿能够快速奔跑,最高时速可达50km h左右,所以主要以鱼、蚌、虾、蟹、鼠类、鸟

      动物简笔画 日期:2017-08-17

    • 简笔牛头图片大全

        魔兽系列中,牛头人在创造它的英语环境里称做托伦(Tauren)。在中文里,人们按照他们的种族外形习惯性的称他们为牛头人。

      优秀简笔画 日期:2017-08-17

    • 简笔海豚

        海豚(学名:Delphinidae)具有齿鲸类典型的形态学性状:纺锤形的身体;单个新月形的呼吸孔;头骨套叠,上颌骨向后扩展与额骨重叠;颅顶偏左的不对称;圆锥形或钉状的齿等。各种间最明显的变异与喙、上下颌、牙齿等

      动物简笔画 日期:2017-08-17

    • 简笔汽车图片

        我国国家最新标准《汽车和挂车类型的术语和定义》(GB T 3730 1—2001)中对汽车有如下定义:由动力驱动,具有4个或4个以上车轮的非轨道承载的车辆,主要用于:载运人员和(或)货物;牵引载运人员和(或)货物的车

      优秀简笔画 日期:2017-08-17

    • 简笔水晶鞋

        水晶鞋是《格林童话》中塑造的童话人物形象灰姑娘(Cinderella)的舞鞋。《灰姑娘》讲述的是一个孝顺且心地善良的女孩子,长期受到继母和姐姐们的虐待,在厨房里做女佣,每天都是灰头土脸脏兮兮的,后来由于善

      物品简笔画 日期:2017-08-17